Rening, karakterisering och transplantation av primära musmyoblaster för cellmedierad genterapi

Transplantationen av odlade myoblaster till mogna skelettmuskler ligger till grund för ett nytt terapeutiskt tillvägagångssätt för muskel- och icke-muskelrelaterade sjukdomar: myoblastmedierad genterapi. Framgången av myoblasttransplantation för korrigering av inneboende muskeldefekter beror på fusionen av de implanterade cellerna med värdens myofibrer. Tidigare studier på möss har varit problematiska eftersom de har inneburit transplantation av etablerade myogena cellinjer eller primära muskelkulturer. Båda dessa cellpopulationer har nackdelar: myogena cellinjer är tumörframkallande, och primära kulturer innehåller en betydande andel icke-myogena celler som inte kommer att fusionera med värdens fibrer. För båda cellpopulationerna har det dessutom varit nödvändigt med immunsuppression av värddjuret för att de transplanterade cellerna skall kunna bibehållas på lång sikt. För att övervinna dessa svårigheter har vi utvecklat nya odlingsförhållanden som gör det möjligt att rena musmyoblaster från primärkulturer. Både berikade och klonala populationer av primära myoblaster karakteriserades i tester av cellproliferation och differentiering. Primära myoblaster var beroende av tillsatt bFGF för tillväxt och behöll förmågan att differentiera även efter 30 populationsdubblingar. De rena myoblastpopulationernas öde efter transplantation övervakades genom att märka cellerna med markörenzymet betagalaktosidas (beta-gal) med hjälp av retroviral medierad genöverföring. Inom fem dagar efter transplantation till muskeln hos mogna möss hade primära myoblaster smält samman med värdmuskelceller för att bilda hybridmyofibrer. För att undersöka immunobiologin hos primära myoblaster jämförde vi transplanterade celler i syngeneiska och allogena värdar. Även utan immunsuppression kvarstod hybridfibrerna med fortsatt beta-gal-uttryck upp till sex månader efter myoblasttransplantationen i syngeneiska värdar. I allogena värdar eliminerades de implanterade cellerna helt inom tre veckor. För att bedöma tumörigeniciteten transplanterades primära myoblaster och myoblaster från den myogena cellinjen C2 till immunbristande möss. Endast C2-myoblasterna bildade tumörer. Den enkla isoleringen, tillväxten och transfektionen av primära musmyoblaster under de förhållanden som beskrivs här utökar möjligheterna att studera muskelcellstillväxt och -differentiering med hjälp av myoblaster från såväl normala som muterade stammar av möss. Egenskaperna hos dessa celler efter transplantation – stabiliteten hos de resulterande hybridmyofibrerna utan immunsuppression, persistensen av transgenuttryck och avsaknaden av tumörigenicitet – tyder på att studier av cellmedierad genterapi med hjälp av primära myoblaster nu kan tillämpas på bred front på musmodeller av mänskliga muskel- och icke-muskelsjukdomar.

Lämna ett svar

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.