Purificarea, caracterizarea și transplantul mioblastelor primare de șoarece pentru terapia genică mediată de celule

Transplantul mioblastelor cultivate în mușchiul scheletic matur este baza unei noi abordări terapeutice pentru bolile musculare și non-musculare: terapia genică mediată de mioblaste. Succesul transplantului de mioblaste pentru corectarea defectelor musculare intrinseci depinde de fuziunea celulelor implantate cu miofibrilele gazdei. Studiile anterioare la șoareci au fost problematice, deoarece au implicat transplantul de linii celulare miogenice stabilite sau culturi musculare primare. Ambele populații de celule prezintă dezavantaje: liniile de celule miogenice sunt tumorigene, iar culturile primare conțin un procent substanțial de celule nemiogenice care nu vor fuziona cu fibrele gazdă. În plus, în cazul ambelor populații celulare, a fost necesară suprimarea imunitară a gazdei pentru păstrarea pe termen lung a celulelor transplantate. Pentru a depăși aceste dificultăți, am dezvoltat noi condiții de cultură care permit purificarea mioblastelor de șoarece din culturile primare. Atât populațiile îmbogățite, cât și populațiile clonale de mioblaste primare au fost caracterizate în testele de proliferare și diferențiere celulară. Mioblastele primare au fost dependente de bFGF adăugat pentru creștere și și-au păstrat capacitatea de diferențiere chiar și după 30 de dublări ale populației. Soarta populațiilor pure de mioblaste după transplant a fost monitorizată prin marcarea celulelor cu enzima marker beta-galactosidază (beta-gal), utilizând transferul de gene mediat de retrovirale. În termen de cinci zile de la transplantul în mușchiul șoarecilor maturi, mioblastele primare au fuzionat cu celulele musculare gazdă pentru a forma miofibre hibride. Pentru a examina imunobiologia mioblastelor primare, am comparat celulele transplantate în gazde syngeneice și alogeneice. Chiar și fără supresie imunitară, fibrele hibride au persistat cu expresie beta-gal continuă până la șase luni după transplantul de mioblaste în gazdele singene. La gazdele alogene, celulele implantate au fost complet eliminate în trei săptămâni. Pentru a evalua tumorigenicitatea, mioblaste primare și mioblaste din linia celulară miogenă C2 au fost transplantate în șoareci imunodeficienți. Numai mioblastele C2 au format tumori. Ușurința izolării, creșterii și transfecției mioblastelor primare de șoarece în condițiile descrise aici extinde posibilitățile de a studia creșterea și diferențierea celulelor musculare folosind mioblaste din tulpini normale, precum și din tulpini mutante de șoareci. Proprietățile acestor celule după transplant – stabilitatea miofibrilelor hibride rezultate fără supresie imunitară, persistența expresiei transgenei și lipsa de tumorigenitate – sugerează că studiile de terapie genică mediată de celule care utilizează mioblaste primare pot fi acum aplicate pe scară largă la modele de șoareci de boli musculare și nemusculare umane.

Leave a Reply

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.