Purificação, caracterização e transplante primário de miooblastos de camundongos para terapia genética mediada por células – PubMed Purificação, caracterização e transplante primário de miooblastos de camundongos para terapia genética mediada por células

O transplante de miooblastos cultivados em músculo esquelético maduro é a base para uma nova abordagem terapêutica das doenças musculares e não musculares: terapia genética mediada por miooblastos. O sucesso do transplante de miooblastos para correção de defeitos musculares intrínsecos depende da fusão das células implantadas com as miofibras hospedeiras. Estudos anteriores em ratos têm sido problemáticos porque envolveram o transplante de linhas celulares miogênicas estabelecidas ou culturas musculares primárias. Ambas as populações celulares têm desvantagens: as linhas celulares miogênicas são tumorigênicas e as culturas primárias contêm uma porcentagem substancial de células não miogênicas que não se fundirão com fibras hospedeiras. Além disso, para ambas as populações celulares, a supressão imunológica do hospedeiro tem sido necessária para a retenção a longo prazo das células transplantadas. Para superar essas dificuldades, desenvolvemos novas condições de cultura que permitem a purificação de miooblastos de camundongos a partir de culturas primárias. Tanto as populações enriquecidas como as clonais de miooblastos primários foram caracterizadas em ensaios de proliferação e diferenciação celular. Os miooblastos primários eram dependentes do bFGF adicionado para o crescimento e mantiveram a capacidade de diferenciação mesmo após 30 duplicações populacionais. O destino das populações de miooblastos puros após o transplante foi monitorado através da rotulagem das células com a enzima marcadora beta-galactosidase (beta-gal) usando a transferência de genes mediada por retrovírus. Dentro de cinco dias após o transplante em músculo de ratos maduros, os miooblastos primários tinham se fundido com células musculares hospedeiras para formar miofibras híbridas. Para examinar a imunobiologia dos miooblastos primários, comparamos as células transplantadas em hospedeiros sinogénicos e alogénicos. Mesmo sem supressão imunológica, as fibras híbridas persistiram com a expressão beta-gal até seis meses após o transplante de miooblastos em hospedeiros sinogênicos. Em hospedeiros alogênicos, as células implantadas foram completamente eliminadas em três semanas. Para avaliar a tumorigenicidade, os miooblastos primários e miooblastos da linha de células miogênicas C2 foram transplantados em camundongos imunodeficientes. Apenas os miooblastos C2 formaram tumores. A facilidade de isolamento, crescimento e transfecção de miooblastos primários de camundongos sob as condições aqui descritas expandem as oportunidades para estudar o crescimento e diferenciação das células musculares usando miooblastos de cepas normais e mutantes de camundongos. As propriedades dessas células após o transplante – a estabilidade das miofibras híbridas resultantes sem supressão imunológica, a persistência da expressão transgênica e a falta de tumorigenicidade – sugerem que os estudos da terapia genética mediada por células usando miooblastos primários podem agora ser amplamente aplicados a modelos de camundongos de doenças musculares e não musculares humanas.

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