Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy

Przeszczepianie hodowanych mioblastów do dojrzałych mięśni szkieletowych jest podstawą nowego podejścia terapeutycznego do chorób mięśni i nie-mięśni: myoblast-mediated gene therapy. Sukces transplantacji mioblastów w celu korekcji wewnętrznych defektów mięśni zależy od fuzji wszczepionych komórek z miofibrami gospodarza. Dotychczasowe badania na myszach były problematyczne, ponieważ polegały na przeszczepianiu ustalonych linii komórek miogennych lub pierwotnych hodowli mięśniowych. Obie te populacje komórek mają wady: miogenne linie komórkowe są nowotworowe, a pierwotne hodowle zawierają znaczny odsetek komórek niemyogennych, które nie łączą się z włóknami gospodarza. Ponadto, w przypadku obu populacji komórek, do długotrwałej retencji przeszczepionych komórek konieczna jest supresja immunologiczna gospodarza. Aby przezwyciężyć te trudności, opracowaliśmy nowe warunki hodowli, które pozwalają na oczyszczanie mysich mioblastów z hodowli pierwotnych. Zarówno wzbogacone jak i klonalne populacje pierwotnych mioblastów zostały scharakteryzowane w testach proliferacji i różnicowania komórek. Pierwotne mioblasty były zależne od dodanego bFGF dla wzrostu i zachowywały zdolność do różnicowania się nawet po 30 podwojeniach populacji. Los czystych populacji mioblastów po transplantacji był monitorowany przez znakowanie komórek enzymem markerowym beta-galaktozydazą (beta-gal) przy użyciu retrowirusowego transferu genów. W ciągu pięciu dni od transplantacji do mięśni dojrzałych myszy, pierwotne mioblasty połączyły się z komórkami mięśniowymi gospodarza, tworząc hybrydowe miofibryle. Aby zbadać immunobiologię pierwotnych mioblastów, porównaliśmy przeszczepione komórki u gospodarzy syngenicznych i allogenicznych. Nawet bez supresji immunologicznej, włókna hybrydowe utrzymywały się z ciągłą ekspresją beta-gal do sześciu miesięcy po transplantacji mioblastów u gospodarzy syngenicznych. U gospodarzy allogenicznych, wszczepione komórki zostały całkowicie wyeliminowane w ciągu trzech tygodni. Aby ocenić nowotworowość, pierwotne mioblasty i mioblasty z miogennej linii komórkowej C2 przeszczepiono myszom z niedoborem odporności. Tylko mioblasty C2 tworzyły guzy. Łatwość izolacji, wzrostu i transfekcji pierwotnych mysich mioblastów w opisanych tu warunkach rozszerza możliwości badania wzrostu i różnicowania komórek mięśniowych przy użyciu mioblastów pochodzących zarówno z normalnych, jak i zmutowanych szczepów myszy. Właściwości tych komórek po transplantacji – stabilność powstających hybrydowych miofibrów bez supresji immunologicznej, trwałość ekspresji transgenu i brak nowotworowości – sugerują, że badania terapii genowej pośredniczonej przez komórki przy użyciu pierwotnych miofiblastów mogą być teraz szeroko stosowane do mysich modeli ludzkich chorób mięśniowych i niemięśniowych.

Leave a Reply

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.