Purification, caractérisation et transplantation de myoblastes primaires de souris pour la thérapie génique à médiation cellulaire

La transplantation de myoblastes cultivés dans le muscle squelettique mature est la base d’une nouvelle approche thérapeutique des maladies musculaires et non musculaires : la thérapie génique à médiation myoblastique. Le succès de la transplantation de myoblastes pour la correction de défauts musculaires intrinsèques dépend de la fusion des cellules implantées avec les myofibres de l’hôte. Les études précédentes chez la souris ont été problématiques car elles ont impliqué la transplantation de lignées de cellules myogéniques établies ou de cultures de muscles primaires. Ces deux populations cellulaires présentent des inconvénients : les lignées de cellules myogéniques sont tumorigènes et les cultures primaires contiennent un pourcentage important de cellules non myogéniques qui ne fusionneront pas avec les fibres de l’hôte. De plus, pour ces deux populations cellulaires, la suppression immunitaire de l’hôte a été nécessaire pour la rétention à long terme des cellules transplantées. Pour surmonter ces difficultés, nous avons développé de nouvelles conditions de culture qui permettent la purification des myoblastes de souris à partir de cultures primaires. Les populations enrichies et clonales de myoblastes primaires ont été caractérisées par des tests de prolifération et de différenciation cellulaires. Les myoblastes primaires dépendaient de l’ajout de bFGF pour leur croissance et conservaient la capacité de se différencier même après 30 doublements de population. Le devenir des populations de myoblastes purs après la transplantation a été suivi en marquant les cellules avec l’enzyme marqueur bêta-galactosidase (bêta-gal) à l’aide d’un transfert de gènes par voie rétrovirale. Dans les cinq jours suivant la transplantation dans le muscle de souris matures, les myoblastes primaires avaient fusionné avec les cellules musculaires hôtes pour former des myofibres hybrides. Pour examiner l’immunobiologie des myoblastes primaires, nous avons comparé les cellules transplantées dans des hôtes syngéniques et allogéniques. Même sans suppression immunitaire, les fibres hybrides ont persisté avec une expression continue de beta-gal jusqu’à six mois après la transplantation des myoblastes chez les hôtes syngéniques. Chez les hôtes allogéniques, les cellules implantées ont été complètement éliminées en trois semaines. Pour évaluer la tumorigénicité, des myoblastes primaires et des myoblastes de la lignée cellulaire myogénique C2 ont été transplantés chez des souris immunodéficientes. Seuls les myoblastes de C2 ont formé des tumeurs. La facilité d’isolement, de croissance et de transfection des myoblastes primaires de souris dans les conditions décrites ici élargit les possibilités d’étudier la croissance et la différenciation des cellules musculaires en utilisant des myoblastes provenant de souches normales ou mutantes de souris. Les propriétés de ces cellules après transplantation – la stabilité des myofibres hybrides résultantes sans immunosuppression, la persistance de l’expression du transgène et l’absence de tumorigénicité – suggèrent que les études de thérapie génique à médiation cellulaire utilisant des myoblastes primaires peuvent maintenant être largement appliquées aux modèles murins de maladies musculaires et non musculaires humaines.

Leave a Reply

Laisser un commentaire

Votre adresse e-mail ne sera pas publiée.