Purifikace, charakterizace a transplantace primárních myších myoblastů pro buněčnou genovou terapii

Transplantace kultivovaných myoblastů do zralého kosterního svalu je základem nového terapeutického přístupu ke svalovým i nesvalovým onemocněním: genové terapie zprostředkované myoblasty. Úspěch transplantace myoblastů pro korekci vnitřních svalových defektů závisí na fúzi implantovaných buněk s myofibrami hostitele. Předchozí studie na myších byly problematické, protože zahrnovaly transplantaci zavedených myogenních buněčných linií nebo primárních svalových kultur. Obě tyto buněčné populace mají nevýhody: myogenní buněčné linie jsou tumorigenní a primární kultury obsahují značné procento nemyogenních buněk, které se nespojí s hostitelskými vlákny. U obou buněčných populací je navíc pro dlouhodobé udržení transplantovaných buněk nutná imunitní suprese hostitele. K překonání těchto obtíží jsme vyvinuli nové kultivační podmínky, které umožňují purifikaci myších myoblastů z primárních kultur. Obohacené i klonální populace primárních myoblastů byly charakterizovány v testech buněčné proliferace a diferenciace. Primární myoblasty byly při růstu závislé na přidaném bFGF a zachovaly si schopnost diferenciace i po 30 zdvojeních populace. Osud čistých populací myoblastů po transplantaci byl sledován značením buněk markerovým enzymem beta-galaktosidázou (beta-gal) pomocí retrovirálně zprostředkovaného přenosu genu. Do pěti dnů po transplantaci do svalů dospělých myší splynuly primární myoblasty se svalovými buňkami hostitele a vytvořily hybridní myofibry. Abychom prozkoumali imunobiologii primárních myoblastů, porovnali jsme transplantované buňky u syngenních a alogenních hostitelů. I bez imunitní suprese přetrvávala hybridní vlákna s pokračující expresí beta-gal až šest měsíců po transplantaci myoblastů u syngenních hostitelů. U alogenních hostitelů byly implantované buňky zcela eliminovány během tří týdnů. Pro posouzení tumorigenity byly primární myoblasty a myoblasty z myogenní buněčné linie C2 transplantovány imunodeficitním myším. Pouze myoblasty C2 tvořily nádory. Snadná izolace, růst a transfekce primárních myších myoblastů za zde popsaných podmínek rozšiřuje možnosti studia růstu a diferenciace svalových buněk pomocí myoblastů z normálních i mutantních kmenů myší. Vlastnosti těchto buněk po transplantaci – stabilita výsledných hybridních myofibril bez potlačení imunitního systému, přetrvávání exprese transgenu a absence tumorigenity – naznačují, že studie buněčné genové terapie pomocí primárních myoblastů lze nyní široce aplikovat na myší modely lidských svalových i nesvalových onemocnění.

Leave a Reply

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.